抗體（antibody，Ab）是機體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋 巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免 疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中?？贵w特異性鑒定是免 疫化學技術中，確?？乖?抗體反應專一性的基礎。從根本上驗證特異性，投稿國際期刊，常常需要準備這方面數(shù)據(jù)。

      鑒定抗體的特異性有四種基本方法：分子遺傳法、獨立抗體驗證法、正交法和標簽蛋白法。四種方法并非必須同時采用。通常，根據(jù)實驗的目的和研究設計的特點，選擇對自己的實驗來說具有說服力的1到2種即可。

1、分子遺傳法。

對于遺傳編碼清楚的蛋白質(zhì)，可采用分子遺傳學技術（基因敲除模型、CRISPR-Cas9、RNA干擾等）將該蛋白的表達水平顯著降低，然后用待檢抗體進行標記。如果得到陽性減弱或消失的結(jié)果，說明抗體標記的正是該蛋白質(zhì)。采用該方法要注意兩個問題。其一，針對基因的敲除或敲減操作不一定能馬上減少相應的蛋白質(zhì)水平。有的蛋白質(zhì)在生物樣本中可能有足量儲備，存在“緩沖池"；必須耗去這部分存量才能觀察到表達的下降。能否在允許的時間內(nèi)下調(diào)蛋白水平，是一個需要預試的問題。其二，基因及相應的蛋白質(zhì)水平下調(diào)后，抗體標記強度減弱，其實驗證了抗體和該基因產(chǎn)物的“相關性"，但嚴格說來，還有可能標記的并不是目標蛋白質(zhì)。尚存在這樣的可能：抗體標記的蛋白質(zhì)是與目標蛋白有密切相互作用的另一種蛋白。比如，目標蛋白減少后，抗體實際標記的蛋白無從錨定（比如膜蛋白），進而在標本處理過程中流失，結(jié)果免 疫標記強度減弱。此時應設計針對性的實驗來補充驗證。

2、獨立抗體驗證法。

同一目標分子，可采用針對不同抗原決定簇的抗體來標記。當需要對某種蛋白分子進行免 疫標記時，如果手中已有經(jīng)過特異性鑒定合格的其他抗體，且識別的結(jié)構(gòu)位點與待檢抗體不同，那么原有抗體就可作為一個良好的陽性參照。如果待檢抗體與原有的合格抗體具有相同的標記結(jié)果，說明待檢抗體的特異性是合格的。本法應用時須注意蛋白分子亞型之間的區(qū)別。比如，待檢抗體與原有合格抗體的識別位點在有的亞型二者都存在，而有的亞型則可能缺少其中之一。結(jié)構(gòu)變化可能引起功能和分布的差別，此時本法就不能起到鑒定作用。

3、正交法。

正交法即采用互不影響的技術對抗體標記的是否為目標分子進行鑒定的方法。比如要鑒定抗體是否能特異性標記某蛋白質(zhì)，可通過質(zhì)譜技術、色譜分離技術、針對**該蛋白的RNA的原位雜交等，與抗體標記一道進行平行實驗。如果不同技術的檢測豐度/強度一致，說明抗體的標記具有特異性。采用該法時須注意各種技術自身的非特異性問題，避免因參照技術本身的特異性缺陷而減弱鑒定結(jié)果的說服力。

4、標簽蛋白法。

可采用FLAG、V5等親和標簽或GFP等熒光偶聯(lián)蛋白對待檢抗體進行鑒定。如果抗親和標簽的抗體標記強度或熒光信號強度與待檢抗體的標記強度一致，則說明待檢抗體具有特異性。